支原體污染細(xì)胞是什么意思
關(guān)鍵詞：
支原體
支原體污染細(xì)胞指的是在細(xì)菌培養(yǎng)的過程當(dāng)中，發(fā)生支原體感染污染的情況，這在培養(yǎng)細(xì)菌的過程當(dāng)中是一個(gè)世界性的難題，常常會(huì)影響檢查的結(jié)果。支原體是最小的一種病原體，它屬于原核生物，在進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)的時(shí)候，不注意就可能會(huì)被支原體出現(xiàn)感染細(xì)胞的情況。所以在這方面一定要有所注意。
污染介紹支原體是一種大小僅為0.2~0.3um，無細(xì)胞壁，可透過一般過濾膜（0.22-0.45um）的原核生物，在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，支原體感染發(fā)生率達(dá)到63%，因而細(xì)胞培養(yǎng)過程中被支原體污染是一個(gè)世界性的難題。當(dāng)細(xì)胞（特別是傳代細(xì)胞）被支原體污染后，細(xì)胞內(nèi)的DNA、RNA及蛋白表達(dá)發(fā)生改變，而細(xì)胞的生長(zhǎng)率一般并未發(fā)生顯著的影響，因而細(xì)胞被支原體污染一般難以察覺。
檢測(cè)方法
一般根據(jù)支原體種類不同，采取不同的方法進(jìn)行檢測(cè)。目前常用的檢測(cè)方法有：1.試劑盒檢測(cè)法：目前已有專門做支原體檢測(cè)的試劑盒，可以用細(xì)胞滴片進(jìn)行檢測(cè)。2.觀察細(xì)胞的形態(tài)和生長(zhǎng)特征：支原體污染比較嚴(yán)重時(shí)可出現(xiàn)生長(zhǎng)減慢，有的培養(yǎng)基pH明顯變酸，并出現(xiàn)細(xì)胞病變，以此可依次對(duì)支原體污染進(jìn)行檢測(cè)，但有些情況下支原體污染引起的病變特征與病毒感染相似，因此不能準(zhǔn)確診斷。3.分離培養(yǎng)法：大多數(shù)支原體可出現(xiàn)特有的典型菌落。因而可依次盡心檢測(cè)，該方法準(zhǔn)確、可靠，但時(shí)間長(zhǎng)，敏感性不夠高。4.DNA結(jié)合熒光素染色法：利用熒光染劑（bisbenzimide,Hoechst33258）偵測(cè)支原體污染。熒光染料會(huì)結(jié)合到DNA之Adenosine-Thymidine（A-T）rich區(qū)域，因?yàn)橹гwDNA中A-T含量占多數(shù)（55～80%），所以可將其染色而偵測(cè)。被支原體污染之細(xì)胞經(jīng)染色后，在細(xì)胞核外與細(xì)胞周圍可看到許多大小均一之熒光小點(diǎn)，即為支原體之DNA，證明有支原體之污染。5.電子顯微鏡和免疫電子顯微鏡法：電子顯微鏡或者免疫電鏡下對(duì)樣本進(jìn)行觀察，此法較準(zhǔn)確，但受條件限制，時(shí)間長(zhǎng)，敏感性不高。6.間接免疫熒光法和免疫印跡：簡(jiǎn)便、快速、特異性強(qiáng)。
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